非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)或稱為(wei) 活性電泳是在不參加SDS 和疏基乙醇等變性劑的條件下，對堅持活性的蛋白質進行聚丙烯酰胺凝膠電泳，常用於(yu) 酶的判定、同非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
聚丙烯酰胺凝膠電泳
工酶剖析和提純。未加SDS的天然非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳能夠使生物大分子在電泳過程中堅持其天然的形狀和電荷，它們(men) 的別離是依據其電泳遷移率的不同和凝膠的分子篩作用，因而能夠得到較高的分辨率，尤其是在電泳別離後仍能堅持蛋白質和酶等生物大分子的生物活性，關(guan) 於(yu) 生物大分子的判定有重要意義(yi) ，其辦法是在凝膠上進行兩(liang) 份一樣樣品的電泳，電泳後將凝膠切成兩(liang) 半，一半用於(yu) 活性染色，對某個(ge) 特定的生物大分子進行判定，另一半用於(yu) 一切樣品的染色，以剖析樣品中各種生物大分子的種類和含量。
非變性聚丙烯酰胺凝膠和變性SDS-PAGE電泳在操作上基本上是一樣的，隻對錯變性聚丙烯酰胺凝膠的製造和電泳緩衝(chong) 液中不能含有變性劑如SDS等。通常蛋白進行非變性凝膠電泳要先辨明是堿性仍是酸性蛋白。別離堿性蛋白時分，要運用低pH凝膠體(ti) 係，別離酸性蛋白時分，要運用高pH凝膠體(ti) 係。 酸性蛋白通常在非變性凝膠電泳中選用的pH是8.8的緩衝(chong) 體(ti) 係，蛋白會(hui) 帶負電荷，蛋白會(hui) 向陽極移動；而堿性蛋白通常電泳是在微酸性環境下進行，蛋白帶正電荷，這時分需要將陰極和陽極倒置才能夠電泳別離堿性蛋白。
非變性凝膠裏邊沒加變性劑，通常是SDS。非變性膠跑出來的蛋白能堅持其活性通常用做功用實驗，如EMSA。因為(wei) 沒有變性劑的原因非變性膠電泳時除了與(yu) 蛋白分子量有關(guan) 也會(hui) 受都電荷的影響，因而對蛋白等電點的斷定和緩衝(chong) 液的酸堿性有注意，有時需要倒轉電泳時的正負極。從(cong) 跑的膠來看，變性膠會(hui) 比較美觀，帶比較窄，非變性膠跑出來則比較粗糙。
1. 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳的過程中，蛋白質的遷移率不隻和蛋白質的等電點有關(guan) ，還和蛋白質的分子量以及分子形狀有關(guan) ，其間蛋白質的等電點是最重要
的影響因子，要依據蛋白質的等電點來挑選對應的電泳緩衝(chong) 體(ti) 係；
2. 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳的過程中，要注意電壓過高致使發熱而致使蛋白質變性，所以最好在電泳槽外麵放置冰塊以降低溫度；
3. 蛋白質的分子量較大，則電泳時刻能夠恰當延伸，以使意圖蛋白質有滿足的遷移率和其它的蛋白質分隔，反之亦然;
4. 變性樣品的離子強度不能太高。
聚丙烯酰胺凝膠電泳用於(yu) 別離蛋白質和寡核苷酸。 作用原理 聚丙烯酰胺凝膠為(wei) 網狀結構，具有分子篩效應。它有兩(liang) 種方式：非變性聚丙烯酰胺凝膠及SDS-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）；非變性聚丙烯酰胺凝膠，在電泳的過程中，蛋白質能夠堅持完好狀況，並依據蛋白質的分子量巨細、蛋白質的形狀及其所順便的電荷量而逐步呈梯度分隔。 依據浙大哲博檢查的別離經曆，能夠發現下列疑問最為(wei) 簡單呈現：
1. pH對全部反應體(ti) 係的影響是至關(guan) 重要的.SDS－PAGE不接連電泳中，製膠緩衝(chong) 液運用的是Tris－HCL緩衝(chong) 體(ti) 係，濃縮膠是pH6.7，別離膠pH8.9；而電泳緩衝(chong) 液運用的Tris－甘氨酸緩衝(chong) 體(ti) 係。在濃縮膠中，其pH環境呈弱酸性，因而甘氨酸解離很少，其在電場的作用下，泳動功率低；而CL離子卻很高，兩(liang) 者之間構成導電性較低的區帶，蛋白分子就介於(yu) 二者之間泳動。因為(wei) 導電性與(yu) 電場強度成反比，這一區帶便構成了較高的電壓梯度，壓著蛋白質分子集合到一同，濃縮為(wei) 一狹窄的區帶。當樣品進入別離膠後，因為(wei) 膠中pH的添加，呈堿性，甘氨酸很多解離，泳動速率添加，直接緊隨氯離子以後，一起因為(wei) 別離膠孔徑的減小，在電場的作用下，蛋白分子依據其固有的帶電性和分子巨細進行別離。
2. 依據樣品別離意圖不同，主要有三種處置辦法：複原SDS處置、非複原SDS處置、帶有烷基化作用的複原SDS處置。
3.聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺與(yu) 為(wei) 蛋白質電泳供給載體(ti) ，其凝結的好壞直接關(guan) 係到電泳成功與(yu) 否，與(yu) 促凝劑及環境密切相關(guan) 。
4. 呈現拖尾現主要是樣品融解作用欠安或別離膠濃度過大致使的。
5.通常膠在30MIN-1H內(nei) 凝。假如凝的太慢，可能是TEMED，APS劑量不夠或許失效。APS大概現配現用，TEMED不穩定，易被氧化成黃色。假如凝的太快，可能是APS和TEMED用量過多，此刻膠太硬易裂，電泳時易燒膠。
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